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emsa实验分析启动子

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如何验证一个蛋白质能与另一个基因的启动亚区结合，有更多的细节 。2.样品预处理a .用1ml celllysisBuffer(10 ^ 7细胞)重悬；在冰上孵育10分钟 ， (5000g，4 ， 5分钟)离心，弃去上清液 ， 可以看看相关文献 ， PCrassistedBindingSiteSelectionChip和EMSA都被使用 。

1、转录因子的作用问题1:什么是转录？转录因子的主要功能是什么？在以DNA为模板合成RNA的过程中 ， 转录因子是转录的启动子 ， 是蛋白质位于细胞核内，与核基因启动亚区的特定序列结合，然后启动转录的过程 。问题2:什么是转录因子，它的生理意义是什么？真核生物中的转录起始非常复杂，经常需要各种蛋白因子的辅助 。转录因子和RNA聚合酶II形成转录起始复合物 ， 共同参与转录起始过程 。

2、酵母单杂交方法 分析转录激活活性的原理和过程0简介酵母杂交技术是分析DNA与细胞内蛋白质相互作用的方法 。通过分析报告酵母细胞中的基因表达，可以鉴定DNA结合位点，并且可以发现潜在的结合蛋白基因 。或分析 。利用该技术可以筛选与DNA结合的蛋白质，不需要复杂的蛋白质分离纯化操作，直接从基因文库中获得编码该蛋白质的核苷酸序列 ， 因此在蛋白质研究中具有一定的优势；而且酵母属于真核细胞，酵母系统得到的结果比其他体外技术得到的结果更能反映真核细胞中基因表达调控的真实情况 。1酵母单杂交技术的原理由Lietal gel于1993年首次提出实验1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验？凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是研究DNA结合蛋白与其相关DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析分析 。该技术最初用于研究DNA结合蛋白，现在已用于研究RNA结合蛋白与特定RNA序列的相互作用 。通常 ， 将纯化的蛋白质、细胞粗提物和32P同位素标记的DNA或RNA探针一起孵育，在非变性聚丙烯凝胶电泳上分离复合物和未结合的探针 。

根据所研究的结合蛋白 ， 同位素标记的探针可以是双链的或单链的 。当检测DNA结合蛋白如转录调节因子时，可以使用纯化的蛋白、部分纯化的蛋白或细胞核提取物 。当检测RNA结合蛋白时，根据靶RNA结合蛋白的位置 ， 可以使用纯化或部分纯化的蛋白或细胞核或细胞质细胞提取物 。在Competition 实验中，含有蛋白质结合序列(特异性)的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段以及其他不相关的片段(非特异性)被用于确定DNA或RNA结合蛋白的特异性 。

3、DNApulldown 实验原理:DNApulldown是一种研究DNA与蛋白质相互作用的方法 。其原理是生物素标记的DNA片段与链霉亲和素磁珠结合，然后与核蛋白孵育 ， 从而捕获并纯化与DNA片段相互作用的蛋白 。一方面，捕获的蛋白质可以通过Westernblot验证特定蛋白质是否与目标DNA片段结合；另一方面，也可以通过质谱鉴定，筛选出可能与DNA片段相互作用的蛋白质 。

B.对于所研究的启动子目标区域，没有特定的预测区域 。通常，引物是针对基因的上游2000bp序列设计的，并用生物素标记；然后通过PCR扩增捕获该基因上游的2000bp序列，回收并纯化该序列作为DNApulldown的探针 。2.样品预处理a .用1 ml细胞溶解缓冲液重悬(10 7个细胞);在冰上孵育10分钟，(5000g，4，5分钟)离心，弃去上清液 。
4、如何验证某蛋白可以与另一基因的 启动子区域结合【emsa实验分析启动子】细节很多，这里就不解释清楚了 。可以看看相关文献，PCrassistedBindingsiteSelectionChip和EMSA都被使用 。有没有什么特定的软件可以查询是否有结合的可能？因为我的蛋白是细胞质的，所以从来没有报道过它有转录因子的功能，双荧光检测~1 。将基因的启动亚区克隆到pGL系列质粒中，2.将“某种蛋白质”的cDNA克隆到真核表达质粒中(如pcDNA系列) 。3.将1和2中的两个质粒共转染到真核细胞中，设立空白组进行培养，4.使用双荧光检测试剂盒(DLA ， 如promega公司 。

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